De fem huvudsystemen i en vätskekromatograf är följande:
1. Insprutningssystem
I allmänhet används en membraninjektionsprovtagare eller högtrycksinjektionsrum för att slutföra injektionsoperationen, och injektionsvolymen är konstant.
Detta är fördelaktigt för att förbättra reproducerbarheten av analytiska prover.
2. Infusionssystem
Systemet består av tre delar: en högtryckspump, en rörlig fasreservoar och en gradienter. Det allmänna trycket för en högtryckspump är 1,47~4,4X107Pa, och flödeshastigheten är justerbar och stabil. När den mobila högtrycksfasen passerar genom kromatografikolonnen kan den minska diffusionseffekten av provet i kolonnen och accelerera dess rörelsehastighet i kolonnen. Detta är fördelaktigt för att förbättra upplösningen, återvinna provet och bibehålla provets biologiska aktivitet. Mobilfaslagringsfel och gradienter kan ändra den mobila fasen enligt egenskaperna hos den stationära fasen och provet, inklusive ändring av elueringsmedlets polaritet, jonstyrka, pH-värde eller byte till andra metoder
3. Separeringssystem
Systemet inkluderar kromatografikolonner, anslutningsrör och termostater.
Längden på en kromatografikolonn är i allmänhet 10-50cm (om två behövs i kombination kan ett anslutande rör läggas till mellan de två), med en innerdiameter på 2-5mm. Den är gjord av högkvalitativt rostfritt stål, tjockväggigt glasrör, titanlegering och andra material. Kolonnen är försedd med en diameter på 5-10 μ En fixerad fas med en partikelstorlek på m (sammansatt av matris och fixerad vätska), i vilken matrisen är sammansatt av harts eller silikagel med hög mekanisk styrka, som båda har egenskaperna av inerthet (såsom det grundläggande avlägsnandet av silikatgener på ytan av silikagel), porositet och stor specifik yta. Dessutom är dess yta mekaniskt belagd (liknande beredning av stationära faser i gaskromatografi) eller kemiskt kopplade med olika gener (såsom fosfat, kvartär amin, hydroximetyl, fenyl, amino eller alkylgrupper med olika långa kolkedjor) eller ligander.
Därför har dessa typer av ämnen med olika fasta relativa strukturer god selektivitet. Till exempel, genom att koppla ärtlektin (PSA) på ytan av porös silikagel, kan ett glykoprotein isoleras från fibroblaster. Dessutom är den stationära fasens plasmid liten, och kolonnbädden är lätt att uppnå ett enhetligt och tätt tillstånd, vilket avsevärt kan minska virvelströmsdiffusionseffekten. Matrisen har liten partikelstorlek och grunda mikroporer, och provet har kort massöverföring i det mikroporösa området. Dessa är fördelaktiga för att minska bandbredden och förbättra upplösningen. Enligt kolumneffektivitetsteorianalysen, ju mindre matrispartikelstorlek, desto större teoretiskt antal N för brickan.
4. Detektionssystem
Det finns tre vanliga detektorer för vätskekromatografi: UV-detektor, differentialbrytningsindexdetektor och fluorescensdetektor
UV-detektor
Denna detektor är lämplig för att detektera prover med absorptionsprestanda för ultraviolett (eller synligt ljus) ljus.
Dess egenskaper: brett spektrum av tillämpningar (såsom proteiner, nukleinsyror, aminosyror, nukleotider, peptider, hormoner, etc. kan användas); Hög känslighet (detektionsgräns på 10-10g/mL); Brett linjärt område; Ej känslig för temperatur- och flödesförändringar; Kan detektera prover eluerade med gradientlösning.
5. Databehandlingssystem
Detta system kan samla in, lagra, visa, skriva ut och bearbeta testdata, vilket möjliggör korrekt separation, förberedelse eller identifiering av prover.
Sammanfattningsvis består vätskekromatografen av ett provsystem, ett infusionssystem, ett separationssystem, ett detektionssystem och ett databehandlingssystem. Kombinationen av dessa system gör experimentet mer tillförlitligt och stabilt.